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  • 產(chǎn)品名稱： Flag標簽蛋白純化試劑盒
  • 產(chǎn)品貨號： CSPR0023K
  • 貨期： 現(xiàn)貨
  • 價格與訂購： 1880
  • 數(shù)量：
    庫存： 10
  • 規(guī)格： 1ml*2 5ml
  • 產(chǎn)品信息
  • 如何訂購
    試劑盒組分

    產(chǎn)品編號

    預裝柱

    濃縮基礎(chǔ)緩沖液(10×)

    濃縮洗脫緩沖液(10×)

    濃縮再生緩沖液(10×)

    CSPPR0023K

    1ml*2

    30ml

    15ml

    15ml

    5ml

    30ml*2

    30ml

    30ml
    產(chǎn)品介紹
    Flag標簽是一個由八個親水氨基酸組成的多肽片段，定位在融合蛋白表面，因此更易與抗體結(jié)合以及被腸激酶分解。Flag標簽蛋白純化試劑盒是以抗Flag(DYKDDDDK)抗體為親和配體，一步純化原核、酵母或哺乳動物細胞表達的Flag標簽融合蛋白。Flag標簽蛋白純化試劑盒里的純化填料以4%瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，雜蛋白非特異性結(jié)合少，可用于Flag標簽融合蛋白的純化和免疫沉淀（IP）。
    產(chǎn)品使用操作
    1.樣品準備
    上柱之前要確保樣品溶液有合適的離子強度和pH值，可以用平衡液對樣品或細胞培養(yǎng)液稀釋,或者用平衡液透析。
    樣品在上樣前建議離心或用0.22 μm或0.45 μm濾膜過濾，減少雜質(zhì),提高蛋白純化效率和防止堵塞柱子。
    2.緩沖液的準備
    基礎(chǔ)緩沖液:按照實驗所用量，取試劑盒中濃縮基礎(chǔ)緩沖液，加入9倍體積的去離子水稀釋成基礎(chǔ)緩沖液；
    洗脫液:按照實驗所需用量，取試劑盒中濃縮洗脫液，加入9倍體積的去離子水稀釋成洗脫液；
    再生液:按照實驗所需用量，取試劑盒中濃縮再生液，加入9倍體積的去離子水稀釋成再生液；
    緩沖液在使用之前建議用0.22μm或0.45μm濾膜過濾。
    3. Flag Beads純化柱的準備
    取出試劑盒中預裝柱平衡到室溫，打開純化柱底部開關(guān)，用3-5個體積去離子水沖洗柱床，隨后用5-10個柱床體積基礎(chǔ)緩沖液平衡柱子，確保柱床無氣泡。
    4.從樣品中純化目標蛋白
    1）使用蠕動泵上樣或者直接上樣（重力法）；
    上樣量不要超過柱子的結(jié)合能力。
    2）上樣完畢后，用基礎(chǔ)緩沖液洗掉未結(jié)合的雜蛋白，直到到紫外吸收監(jiān)測儀達到一個穩(wěn)定的基線（一般需要10-15個柱體積）；
    3）使用洗脫液洗脫目的蛋白，順次接收并做好標記，直到到紫外吸收監(jiān)測儀達到一個穩(wěn)定的基線（一般需要5-10個柱體積）；
    4）SDS-PAGE檢測分析得到的純化樣品（包括流穿組分、洗雜組分和洗脫組分）以及原始樣品。
    5.純化柱清洗、再生與保存。
    1）5-10倍柱床體積的洗脫緩沖液繼續(xù)清洗；
    2）3倍柱床體積的去離子水清洗；
    3）5-10倍柱床體積的0.1M NaOH溶液；
    4）3倍柱床體積去離子水清洗后于含20%乙醇的PBS 2-8℃保存。
    Note
    For research use only .