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  • 產(chǎn)品名稱(chēng)： SplintR Ligase
  • 產(chǎn)品貨號(hào)： CS1359
  • 貨期： 現(xiàn)貨
  • 價(jià)格與訂購(gòu)： 1000
  • 數(shù)量：
    庫(kù)存： 5
  • 規(guī)格： 2000U 10KU
  • 產(chǎn)品信息
  • 如何訂購(gòu)
    產(chǎn)品說(shuō)明
    SplintR 連接酶也稱(chēng)為PBCV-1 DNA連接酶或Chorella病毒DNA連接酶，在A(yíng)TP作為輔助因子條件下，在模板RNA鏈存在下，高效連接與RNA鏈互補(bǔ)的相鄰的DNA的5′磷酸末端和3′羥基末端。被連接的可以是兩條DNA單鏈；也可以是一條DNA的5’端與3’端與RNA模板以環(huán)狀形式配對(duì)，連接成一個(gè)環(huán)狀的DNA單鏈。因此非常適合基于鎖式探針(Padlock probe)或上下游雙探針的microRNA檢測(cè)。鎖式探針是一種較長(zhǎng)的單鏈DNA寡核苷酸片段，兩個(gè)末端和靶標(biāo)序列毗鄰互補(bǔ)，探針中間的一段序列不與靶標(biāo)序列配對(duì)，可以作為通用引物的結(jié)合位點(diǎn)。本酶對(duì)于平末端、粘性末端的連接、以及雙鏈DNA、雙鏈RNA、DNA/RNA雜交雙鏈中的單鏈切口都可以連接。SplintR 連接酶的這種活性可以用于miRNAs等微小RNA和mRNA 的檢測(cè)與單核苷酸多態(tài)性SNP分析。在二代測(cè)序和分子診斷等眾多領(lǐng)域中，SplintR是富集目的基因的理想選擇。SplintR連接酶是RNA檢測(cè)的最佳用酶，其對(duì)RNA介導(dǎo)固定的DNA底物親和性強(qiáng)（米氏常數(shù) Km = 1 nM），能夠在復(fù)雜的混合物中檢測(cè)到亞納摩爾級(jí)的特定RNA。
    SplintR 連接酶在廣泛條件下，例如10 μM - 1 mMATP，pH 6.5–9.0，均有活性。其中最優(yōu)反應(yīng)條件為高于5 mM Mg2+，pH 7.5 - 8.0。37°C反應(yīng)，補(bǔ)充5 mM Mn2+可以提高反應(yīng)活性。高于100 mM一價(jià)陽(yáng)離子抑制酶活性。相比dA/U堿基對(duì), 5’端dC/G與dG/C 堿基對(duì)對(duì)連接反應(yīng)具有部分抑制作用，特別是相鄰的堿基對(duì)也是C/G的情況。
    活性定義
    1單位指在溫度為25℃，1× SplintR Ligase 反應(yīng)緩沖體系的條件下，15min內(nèi)連接50%的2pmol DNA鏈（與RNA雜交配對(duì)形成的帶缺口的DNA/RNA底物）所需的酶量。
    活性測(cè)定條件
    50 mM Tris-HCl ，1 mM ATP，10 mM MgCl2，10 mM DTT(pH 7.5 @ 25℃)，25℃ 溫育。
    濃度
    25U/μl
    保存條件
    -20℃保存
    特點(diǎn)與適用范圍
    1. 基于DNA探針連接進(jìn)行RNA檢測(cè)
    2.SNP或剪接變異檢測(cè)
    3.基于鎖式探針(Padlock probe)的microRNA檢測(cè)
    4.互補(bǔ)RNA序列配對(duì)的單鏈DNA連接反應(yīng)
    5. RASL-seq（RNA-mediated oligonucleotide annealing, selection, and ligation with next-generation sequencing）
    6.熱失活：65℃ 加熱20min。
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    Note
    For research use only. Not suitable for clinical or therapeutic use.