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- 產(chǎn)品名稱： Exonuclease III
- 產(chǎn)品貨號(hào)： CSRE0118
- 貨期： 現(xiàn)貨
- 價(jià)格與訂購(gòu)： 200
- 數(shù)量：
庫(kù)存： 50
- 規(guī)格： 5 KU
- 產(chǎn)品信息
- 如何訂購(gòu)
產(chǎn)品描述
Exonuclease III 是一種核酸外切酶，該酶作用于雙鏈 DNA，從 3'OH 末端方向逐步切去單核苷酸。該酶最適 底物是平末端或 5'末端突出的 DNA，但也可以作用于雙鏈 DNA 切刻位點(diǎn)產(chǎn)生單鏈缺口。由于對(duì)單鏈 DNA 無(wú) 活性，因此該酶難以切割 3'突出末端。3'到 5'外切酶活性對(duì)底物的消化程度隨 3'突出末端的長(zhǎng)度而變化，四堿 基或更長(zhǎng)的突出末端難以被切割。這種特性可以用于生產(chǎn)特定方向的單鏈 DNA，將線性化 DNA 設(shè)計(jì)成為一端 為不切割末端（3'突出端），另一端則設(shè)計(jì)為易切割末端（平端或 5'突出端），此時(shí) Exonuclease III 將僅消化一 條鏈。
Exonuclease III 的活性部分依賴 DNA 雙螺旋結(jié)構(gòu)，并根據(jù)序列的不同而有差異（C＞A=T＞G）。此外，該酶也 有 RNase H、3’-磷酸酶、脫嘌呤/嘧啶（AP）位點(diǎn)特異性核酸內(nèi)切酶活性。
產(chǎn)品組分
核酸外切酶濃度：100U/μL
保存條件
-30 ~ -15℃保存。運(yùn)輸條件：≤0℃。
單位定義
一個(gè)酶活單位 (U) 的定義是以雙鏈 DNA 為底物在 37℃下孵育 30 min，生成 1 nmol 的酸可溶性物所需的酶量。
適用場(chǎng)景
（1）單向嵌套缺失；
（2）定點(diǎn)突變；
（3）單鏈特異性探針的制備；
（4）雙脫氧測(cè)序用單鏈底物的制備。
使用方法
（1） 按如下建議配制體系反應(yīng)液（冰上操作）：
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DNA
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~5 μg
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10×Exo III Buffer
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5 μl
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Exonuclease III
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0.5 μl
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Nuclease-Free Water
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To 50 μl |
（2）37℃孵育 30 min；
（3）加入終濃度為 11 mM 的 EDTA 終止反應(yīng)或 70℃孵育 30 min 使 Exonuclease III 失活；
（4）瓊脂糖電泳檢測(cè)雙鏈 DNA 酶切結(jié)果。
注意事項(xiàng)
Exonuclease III 不能切割硫代磷酸酯鍵。因此，也可以通過(guò)引入一個(gè) α-硫代磷酸核苷酸將 DNA 分子的一端保護(hù)起來(lái)，以進(jìn)行單向切割。這種特性可以用于對(duì)一端為鈍化末端（3’突出端），另一端是敏感末端（平端或 5’突出端）的線性 DNA 分子進(jìn)行單方向切割。
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Note
For research use only .
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