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- 產(chǎn)品名稱： HABA法生物素標(biāo)記效率檢測試劑盒
- 產(chǎn)品貨號： ARL0021T1
- 貨期： 現(xiàn)貨
- 價格與訂購： 2580
- 數(shù)量：
庫存： 100
- 規(guī)格： 10T
- 產(chǎn)品信息
- 如何訂購
產(chǎn)品介紹
2-（4-羥基苯偶氮）苯甲酸(2-(4-Hydroxyphenylazo)benzoic acid ,英文縮寫HABA)可以與親和素特異性結(jié)合，其結(jié)合復(fù)合物為一種黃色或者橘黃色，在500nm有最大吸光值；但是其結(jié)合力遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于生物素與親和素的結(jié)合，當(dāng)溶液中存在生物素的時候，生物素會強(qiáng)競爭讓HABA解離下來,引起吸光值下降?；诖嗽?，可以根據(jù)500nm吸光值的變化計算出蛋白標(biāo)記生物素的量（被標(biāo)記蛋白與生物素的摩爾比）。
生物素標(biāo)記摩爾比的計算是基于比爾-朗伯定律（Beer–Lambert law），又稱比爾定律或比耳定律（Beer's law），是分光光度法的基本定律，即當(dāng)一束平行單色光垂直通過某一均勻非散射的吸光物質(zhì)時，其吸光度（Absorbance，A）與吸光物質(zhì)的濃度（Consenreation，C）及吸收層厚度（length，L）成正比, 用公式表示為：A = ε*C* L其中A為光度，ε為摩爾吸光系數(shù),所以此處公式為A 500= ε500 C L（此處ε500=34,000M-1cm-1）
主要組分
| 組分名稱（Components） | 規(guī)格 | 組分說明 |
| HABA- Avidin混合液(干粉) | 1VL | 臨用前加ddH2O 定容到10ml |
| PBS(pH7.2) | 30ml | 100mM 磷酸鈉，150mM NaCl |
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儲存條件
該試劑盒在低溫下運(yùn)輸，收到后請置于2-8℃保存，保存時間2年以上。
實(shí)驗(yàn)操作可以選擇分光光度法或微孔酶標(biāo)板法
分光光度法：
A． 取900uL HABA- Avidin混合液放入1cm光程比色杯，在500nm波長測量吸光值，記錄為A500(H-A);最好測量三次取平均值；
B． 在比色杯中加入100uL待測的生物素標(biāo)記蛋白（Biotinylated Protein,簡稱BP），充分混勻后，在500nm波長測量吸光值，吸光值穩(wěn)定20秒以上，記錄為A500(H-A-BP);最好測量三次取平均值；如果A500(H-A-BP)<0.35,請用PBS稀釋待測樣品，再次重復(fù)此步驟。
微孔酶標(biāo)板法：
微孔酶標(biāo)板法：
A. 取180uL HABA- Avidin混合液放入微孔板中，在500nm波長測量吸光值，記錄為A500(H-A);最好測量三次取平均值；
B. 在微孔板中加入20uL待測的生物素標(biāo)記蛋白（Biotinylated Protein,簡稱BP），震蕩或移液器吹打充分混勻后，在500nm波長測量吸光值，吸光值穩(wěn)定20秒以上，記錄為A500(H-A-BP);最好測量三次取平均值；如果A500(H-A-BP)< 0.3*A500(H-A),請用PBS稀釋待測樣品，再次重復(fù)此步驟。
標(biāo)記效率計算方法
案例演示
以Frdbio超級生物標(biāo)記試劑盒（貨號：ARL0021SK）標(biāo)記Anti-Covid-19 Spike Mab (貨號：nCoV-S-hMab-B)，標(biāo)記后測算標(biāo)記比，分光光度計法。
本案例中被標(biāo)記蛋白為抗體，分子量（MW）為150,000,濃度為5.0mg/mL，A500(H-A)=1.090，A500(H-A-BP)=0.585，
抗體摩爾濃度計算：mM /mL=5/150000=3.33*10-5
ΔA500=（0.9*1.090）- 0.585=0.396
生物素摩爾濃度計算：mM /mL=0.396/(34000*1)=1.16*10-5
抗體：生物素（摩爾比）=(3.33*10-5)/(1.16*10-5*10)=1:3.48
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