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實驗前準(zhǔn)備：

1.仔細(xì)閱讀使用說明書。

2.提前20min 從冰箱中取出試劑盒，使試劑盒各組分平衡至室溫；

3.用FITC助溶劑（DMSO，使用前需要放在室溫融化）溶解FITC。

 特別提示：

A.溶解的活好FITC最好一次性使用完，如果使用不完可以密封放在-20℃的冰箱內(nèi)，一周內(nèi)可以使用，但是標(biāo)記效率會降低；

B.FITC助溶劑使用完之后需要立即密封保存，防止吸潮。

操作步驟：（本操作步驟按照 1mg抗體的量進(jìn)行標(biāo)記）

1.取1mg 待標(biāo)記抗體于超濾管中，并加入不超過超濾管最大體積的標(biāo)記緩沖液， 12,000 g 離心 10min；可以重復(fù)此步驟多次；最后一次超濾完成，可以加入適量標(biāo)記緩沖液調(diào)整抗體的濃度到2mg/mL左右；

A.超濾管的最大體積和最大截留分子量，本實例超濾管的最大體積為 0.5mL；

B.如果待標(biāo)記抗體濃度低時，可先超濾離心濃縮；

C.如果待標(biāo)記物含有游離的氨基（Tris,氨基酸或者其他干擾物，需要用標(biāo)記緩沖液反復(fù)超濾確保其去除干凈）。

2.加入溶解的FITC 50μL至上述超濾管中，并輕輕吹打混勻。放入37℃恒溫箱中避光溫育 60min以上；

3.標(biāo)記結(jié)束以后加入 1/10體積的FITC清除指示劑至上述超濾管中；

4.12,000g 離心 10min；

5.加入適量標(biāo)記緩沖液至上述超濾管中，并輕輕吹打混勻，12,000g 離心 10min。并重復(fù)操作多次，直至超濾管中沒有藍(lán)色，未標(biāo)記的FITC被徹底清除干凈；收集超濾管中的溶液，即為FITC標(biāo)記抗體。

標(biāo)記偶聯(lián)比率的計算:

C是某個蛋白的一個常數(shù)；

MW是蛋白的分子量；

389是FITC的分子量；

195是偶聯(lián)的FITC在490nm（PH13.0）情況下1mg/ml的吸光值；

(0.35ⅹA495)是FITC在280nm情況下吸光值的校正系數(shù)；

E0.1%是1.0 mg/ml的蛋白在280nm的吸光值。

選購之前客戶需要根據(jù)待標(biāo)記物的分子量大小和標(biāo)記量選擇最適宜的型號