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  • 產(chǎn)品名稱： 可溶性蛋白含量(SP)試劑盒(考馬斯亮藍(lán)法) 微板法
  • 產(chǎn)品貨號(hào)： CSWB0369-96
  • 貨期： 現(xiàn)貨
  • 價(jià)格與訂購(gòu)： 260
  • 數(shù)量：
    庫(kù)存： 5
  • 規(guī)格： 96T
  • 產(chǎn)品信息
  • 如何訂購(gòu)
    產(chǎn)品簡(jiǎn)介
    在酸性溶液中，考馬斯亮藍(lán)G-250與蛋白質(zhì)結(jié)合形成藍(lán)色復(fù)合物；經(jīng)光譜掃描，該藍(lán)色復(fù)合物在600nm處有最大吸收峰，在一定的蛋白濃度范圍（1-1000μg/mL）內(nèi)，其顏色的深淺與蛋白質(zhì)的含量成正比。
    測(cè)試盒組成和配制
           
               
    所需的儀器和用品
    酶標(biāo)儀、96孔板、離心機(jī)、可調(diào)式移液器、研缽和蒸餾水。
    四、蛋白含量檢測(cè)：
    建議正式實(shí)驗(yàn)前選取2個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)樣本和試劑浪費(fèi)！
    1、樣本制備： 
    ①組織樣本：
    稱取約0.1g組織，加入1mL提取液（提取液可選用酶提取緩沖液、蒸餾水、生理鹽水）冰浴勻漿，12000rpm，4℃離心10min，取上清，即待測(cè)液。
    【注】：依據(jù)研究經(jīng)驗(yàn)，一般需將樣本粗提液稀釋到適當(dāng)倍數(shù)再進(jìn)行測(cè)定，如10倍。實(shí)驗(yàn)前可以先選2個(gè)樣本測(cè)定，摸索確定適合本次實(shí)驗(yàn)的稀釋倍數(shù)。
    ②細(xì)菌或細(xì)胞樣本：
    先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液；超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次），12000rpm，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
    【注】：依據(jù)研究經(jīng)驗(yàn)，一般需將樣本粗提液稀釋到適當(dāng)倍數(shù)再進(jìn)行測(cè)定，如10倍。實(shí)驗(yàn)前可以先選2個(gè)樣本測(cè)定，摸索確定適合本次實(shí)驗(yàn)的稀釋倍數(shù)。
    ③液體樣本：澄清無(wú)色液體樣品可以直接測(cè)定。若渾濁，離心后取上清檢測(cè)。
    【注】：依據(jù)研究經(jīng)驗(yàn)，一般需將樣本稀釋到適當(dāng)倍數(shù)再進(jìn)行測(cè)定，如10倍。實(shí)驗(yàn)前可以先選2個(gè)樣本測(cè)定，摸索確定適合本次實(shí)驗(yàn)的稀釋倍數(shù)。
    2、上機(jī)檢測(cè)：
    ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上，設(shè)定波長(zhǎng)為600nm。
    ② 在96孔板中依次加入：
                        
     
    【注】：1.確保蛋白濃度在0~100μg/ml范圍內(nèi)，否則需要做相應(yīng)稀釋，即最好使A測(cè)定的值低于1.2；稀釋倍數(shù)D帶入公式計(jì)算。
              2.去污劑、Triton X-100、十二烷基硫酸鈉（SDS）和0.1mol/L的NaOH溶液對(duì)該實(shí)驗(yàn)會(huì)有影響。
    結(jié)果計(jì)算
    1、標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 3.8457x + 0.0136；x是標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y是△A。

      

     
    2、蛋白含量 (mg/g 鮮重)=[(△A-0.0136)÷3.8457×V1]÷(W×V1÷V)×D 
    =0.26×(△A-0.0136)×D÷W
    3、蛋白含量(mg/mL)= [(△A-0.0136)÷3.8457×V1]÷V1×D=0.26×(△A-0.0136)×D
     
     
    V---提取液體積：1mL；           V1---加入粗提液體積：0.04mL；
    W---樣本質(zhì)量：g；                D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為1。
    附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程：
    1標(biāo)準(zhǔn)品母液（0.5mg/mL）。
    2把母液用蒸餾水稀釋成以下濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1. mg/mL。也可根據(jù)實(shí)際樣本來(lái)調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。
    3依據(jù)測(cè)定管加樣表操作，根據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。