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- 產(chǎn)品名稱： JM 109 Competent Cell
- 產(chǎn)品貨號(hào)： CSKT107L
- 貨期： 現(xiàn)貨
- 價(jià)格與訂購(gòu)： 360
- 數(shù)量：
庫(kù)存： 5
- 規(guī)格： 200×100ul
- 產(chǎn)品信息
- 如何訂購(gòu)
產(chǎn)品規(guī)格
Cat No：CSKT107L （100μl×200支）
pUC19(control vector): 100pg/μl 5 μl
保存條件： -80℃
保質(zhì)期： 6個(gè)月
基因型
endA1 recA1 gyrA96 thi-1 relA1 supE44 hsdR17 (rK-,mK+) Δ(lac - proAB)/F' [ traD36 proAB+ laqIq lacZΔM15]
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產(chǎn)品說明
JM 109感受態(tài)細(xì)胞recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。攜帶hsdR17基因型背景，使得異源DNA不被內(nèi)源核酸酶系統(tǒng)降解。lacZΔM15的存在使JM 109可用于構(gòu)建克隆，藍(lán)白斑篩選實(shí)驗(yàn)。JM 109感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108cfu/μg DNA。
操作方法
一 、熱激轉(zhuǎn)化法
1. 從-80℃冰箱取出感受態(tài)細(xì)胞冰浴融化后，吸取100μl感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到-20℃過夜預(yù)冷的搖菌管中，加入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物，輕輕混勻，冰浴30分鐘。
2. 42℃水浴熱激60秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，該過程不要搖動(dòng)搖菌管。
3. 向搖菌管中加入900μl 37℃溫浴的SOC或LB（SOC培養(yǎng)基可提高2-3倍轉(zhuǎn)化效率），37℃、180rpm、45分鐘復(fù)蘇菌種。
4. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求（質(zhì)粒，重組連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化），吸取不同體積已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的LB瓊脂培養(yǎng)基上，將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于37℃至液體被吸收，倒置平板，37℃過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。
二 、10分鐘快速轉(zhuǎn)化法
注：在使用卡那霉素，四環(huán)素等作為篩選抗性時(shí)，需要在SOC培養(yǎng)基中復(fù)蘇以提高轉(zhuǎn)化效率，當(dāng)使用氨芐青霉素作為篩選抗性時(shí)，該步驟可以省略。感受態(tài)細(xì)胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分鐘后加入4倍體積的37℃溫浴的SOC培養(yǎng)基，在37℃ 180rpm孵育1小時(shí)，然后轉(zhuǎn)移到37℃預(yù)熱的LB培養(yǎng)基上。
1. 提前15分鐘將用到的篩選培養(yǎng)基平板拿到37℃預(yù)熱。
2. JM 109感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA并用手撥打EP管底輕輕混勻，冰中靜置5分鐘。
3. 用200μl槍將感受態(tài)細(xì)胞-DNA混合物轉(zhuǎn)移到已經(jīng)37℃預(yù)熱的LB培養(yǎng)基上，涂均勻，表面無水漬。
4. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。
注意事項(xiàng)
1. 剛剛化凍的細(xì)胞，轉(zhuǎn)化效率最高。
2. 避免反復(fù)化凍。
3. 避免移液槍吹吸。
4. 整個(gè)操作過程要輕柔。
5. 重組產(chǎn)物不建議用10分鐘快速轉(zhuǎn)化法。
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Note
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