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  • 產(chǎn)品名稱： cGMP ELISA Kit檢測(cè)試劑盒
  • 產(chǎn)品貨號(hào)： BK201
  • 貨期： 現(xiàn)貨
  • 價(jià)格與訂購(gòu)： 3800
  • 數(shù)量：
    庫存： 5
  • 規(guī)格： 96T
  • 產(chǎn)品信息
  • 如何訂購(gòu)
    背景介紹
    cAMP和cGMP都是小分子的環(huán)狀核苷酸，以微量存在于動(dòng)植物細(xì)胞和微生物中，被稱其為細(xì)胞內(nèi)的第二信使（激素為第一信使）。
    cAMP（或cGMP）由腺苷酸（或鳥苷酸）環(huán)化酶產(chǎn)生，被磷酸二酯酶降解，因此激活腺苷酸（或鳥苷酸）環(huán)化酶或者抑制磷酸二酯酶，可以提高細(xì)胞內(nèi)cAMP（或cGMP）的含量。研究發(fā)現(xiàn)，cAMP（或cGMP）特異性磷酸二酯酶的抑制劑可用于人類疾病的治療。如：增強(qiáng)β腎上腺素能受體（cAMP的封閉劑）已被用于心率失調(diào)、高血壓、心肌梗死等心臟疾病；cAMP特異性磷酸二酯酶2/4的抑制劑正在進(jìn)行認(rèn)知增強(qiáng)方面的臨床測(cè)試；而cGMP特異性磷酸二酯酶類型5可用于治療ED等疾病。
    在五十年的研究歷程中，從開始研究cAMP，cGMP在各種生理過程中的調(diào)節(jié)作用，到近幾年與之相關(guān)的藥物研發(fā)，藥物篩選領(lǐng)域，人們一直在努力尋找一種快速、靈敏、特異性和可重復(fù)地定量檢測(cè)cAMP和cGMP含量的方法。
    cAMP，cGMP分子量分別只有329.21和345.21，在機(jī)體內(nèi)的含量極低，為pmol/L級(jí)別，用一般的分析方法無法測(cè)定。70年代一系列測(cè)定cAMP和cGMP的方法被發(fā)明出來，最基本的原理有三種：分別是競(jìng)爭(zhēng)性蛋白質(zhì)結(jié)合分析法、放射性免疫分析法和薄層色譜法。
    本試劑盒利用競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析方法來測(cè)定細(xì)胞提取物或體外腺苷酸環(huán)化酶實(shí)驗(yàn)中的cGMP的水平。包被羊抗鼠多克隆抗體在酶標(biāo)板上，細(xì)胞提取物或體外腺苷酸環(huán)化酶實(shí)驗(yàn)中的cGMP與固定數(shù)量的標(biāo)記辣根過氧化物酶的cGMP競(jìng)爭(zhēng)性的結(jié)合抗cGMP單克隆抗體，采用已知濃度的cGMP標(biāo)準(zhǔn)品來做標(biāo)準(zhǔn)曲線。檢測(cè)450nm波長(zhǎng)下的OD值，吸光度OD值與樣品中cGMP的濃度呈反比關(guān)系?；赾GMP標(biāo)準(zhǔn)品所得曲線，通過測(cè)得的OD值可以計(jì)算出樣品中cGMP的濃度，本試劑盒IC50（50% B/B0）約5 pmol/mL，檢測(cè)限約0.1 pmol/mL。
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    所需材料
    酶標(biāo)儀（檢測(cè)波長(zhǎng)450 nm，參比波長(zhǎng)630nm）
    各種型號(hào)加樣槍和槍頭
    EP管
    微孔板振蕩器
    吸水紙
    去離子水
    樣本處理
    組織樣本：新鮮收集的組織樣本必須立即凍存在液氮中。使用前去除冰凍樣本稱重，加入5-10倍體積的0.1M HCl。用勻漿器在冰上勻漿。然后室溫離心5min（＞600 g）。留上清，可以直接實(shí)驗(yàn)，或用0.1M HCl稀釋。
    細(xì)胞樣本：去除培養(yǎng)基，加入適量0.1M HCl（在0.1M HCl中加入0.1%~1% Triton X-100可增強(qiáng)細(xì)胞的溶解效果），放置10min，期間觀察以確認(rèn)細(xì)胞是否發(fā)生溶解。如果溶解不充分，可以再增加10min，直至細(xì)胞完全溶解。室溫離心5min（600 g）。留上清，用于本試劑盒檢測(cè)。注：上述濃度的Triton X-100不會(huì)影響樣品與板的結(jié)合，但可能會(huì)增加背景值，建議用含相同濃度Triton X-100稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，以去除誤差。
    尿液、血漿和培養(yǎng)液：每ml樣品中加入10μl濃鹽酸（12M），混勻后，室溫離心5min（600 g），留上清，用于本試劑盒檢測(cè)。血漿、血清、全血和組織勻漿通常含有磷酸二酯酶（phosphodiesterases）和大量免疫球蛋白（Ig），它們會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)。用0.1 M HCl處理樣品，可以滅活磷酸二酯酶和降低免疫球蛋白的濃度，使之可以用于本試劑盒。磷酸二酯酶和免疫球蛋白也可以通過加入2% TCA（三氯乙酸）使之沉淀或用截留分子量10 KD的超濾離心管去除。
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    注意事項(xiàng)
    1.本試劑盒所有相關(guān)試劑均預(yù)先平衡至室溫（20-25℃）。
    2.各孔分別加入標(biāo)準(zhǔn)品和樣品。
    3.沿孔壁加入各試劑，避免交叉污染。
    4.本試劑盒提供的是可分拆的孔板條，使用者可以按照樣品數(shù)量選擇使用量。未用的孔板請(qǐng)放回原封口袋，保存在4℃?？装逭?qǐng)放在本試劑盒配送的孔板架上使用。
    5.加入底物前，請(qǐng)確?？字袥]有殘余液體。
    6.終止液具有腐蝕性，請(qǐng)小心使用。
    For Research Use Only.