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- 產(chǎn)品名稱: cAMP ELISA kit檢測試劑盒
- 產(chǎn)品貨號: BK101
- 貨期: 現(xiàn)貨
- 價格與訂購: 3800
- 數(shù)量:
- 規(guī)格: 96T
- 產(chǎn)品信息
- 如何訂購
背景介紹
cAMP和cGMP都是小分子的環(huán)狀核苷酸,以微量存在于動植物細(xì)胞和微生物中,被稱其為細(xì)胞內(nèi)的第二信使(激素為第一信使)。
cAMP(或cGMP)由腺苷酸(或鳥苷酸)環(huán)化酶產(chǎn)生,被磷酸二酯酶降解,因此激活腺苷酸(或鳥苷酸)環(huán)化酶或者抑制磷酸二酯酶,可以提高細(xì)胞內(nèi)cAMP(或cGMP)的含量。研究發(fā)現(xiàn),cAMP(或cGMP)特異性磷酸二酯酶的抑制劑可用于人類疾病的治療。如:增強(qiáng)β腎上腺素能受體(cAMP的封閉劑)已被用于心率失調(diào)、高血壓、心肌梗死等心臟疾??;cAMP特異性磷酸二酯酶2/4的抑制劑正在進(jìn)行認(rèn)知增強(qiáng)方面的臨床測試;而cGMP特異性磷酸二酯酶類型5可用于治療ED等疾病。
在五十年的研究歷程中,從開始研究cAMP,cGMP在各種生理過程中的調(diào)節(jié)作用,到近幾年與之相關(guān)的藥物研發(fā),藥物篩選領(lǐng)域,人們一直在努力尋找一種快速、靈敏、特異性和可重復(fù)地定量檢測cAMP和cGMP含量的方法。
cAMP,cGMP分子量分別只有329.21和345.21,在機(jī)體內(nèi)的含量極低,為pmol/L級別,用一般的分析方法無法測定。70年代一系列測定cAMP和cGMP的方法被發(fā)明出來,最基本的原理有三種:分別是競爭性蛋白質(zhì)結(jié)合分析法、放射性免疫分析法和薄層色譜法。
本試劑盒利用競爭酶聯(lián)免疫分析方法來測定細(xì)胞提取物或體外腺苷酸環(huán)化酶實驗中的cAMP的水平。包被羊抗鼠多克隆抗體在酶標(biāo)板上,細(xì)胞提取物或體外腺苷酸環(huán)化酶實驗中的cAMP與固定數(shù)量的標(biāo)記辣根過氧化物酶的cAMP競爭性的結(jié)合抗cAMP單克隆抗體,采用已知濃度的cAMP標(biāo)準(zhǔn)品來做標(biāo)準(zhǔn)曲線。檢測450nm波長下的OD值,吸光度OD值與樣品中cAMP的濃度呈反比關(guān)系?;赾AMP標(biāo)準(zhǔn)品所得曲線,通過測得的OD值可以計算出樣品中cAMP的濃度,本試劑盒IC50(50% B/B0)約12pmol/mL,檢測限約0.15 pmol/mL。
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所需材料
酶標(biāo)儀(檢測波長450 nm,參比波長630nm)
各種型號加樣槍和槍頭
EP管
微孔板振蕩器
吸水紙
去離子水
樣本處理
1.組織樣本:新鮮收集的組織樣本必須立即凍存在液氮中。使用前去除冰凍樣本
稱重,加入5-10倍體積的0.1M HCl。用勻漿器在冰上勻漿。然后室溫離心5min(>600 g)。留上清,可以直接實驗,或用0.1M HCl稀釋。
2. 細(xì)胞樣本:去除培養(yǎng)基,加入適量0.1M HCl(在0.1M HCl中加入0.1%~1%
Triton X-100可增強(qiáng)細(xì)胞的溶解效果),放置10min,期間觀察以確認(rèn)細(xì)胞是否發(fā)生溶解。如果溶解不充分,可以再增加10min,直至細(xì)胞完全溶解。室溫離心5min(600 g)。留上清,用于本試劑盒檢測。注:上述濃度的Triton X-100不會影響樣品與板的結(jié)合,但可能會增加背景值,建議用含相同濃度Triton X-100稀釋標(biāo)準(zhǔn)品,以去除誤差。
3. 尿液、血漿和培養(yǎng)液:每ml樣品中加入10μL濃鹽酸(12M),混勻后,室溫離心
5min(600 g),留上清,用于本試劑盒檢測。血漿、血清、全血和組織勻漿通常含有磷酸二酯酶(phosphodiesterases)和大量免疫球蛋白(Ig),它們會干擾實驗。用0.1 M HCl處理樣品,可以滅活磷酸二酯酶和降低免疫球蛋白的
濃度,使之可以用于本試劑盒。磷酸二酯酶和免疫球蛋白也可以通過加入5% TCA(三氯乙酸)使之沉淀或用截留分子量10 KD的超濾離心管去除。
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注意事項
1. 本試劑盒所有相關(guān)試劑均預(yù)先平衡至室溫(20-25℃)。
2. 各孔分別加入標(biāo)準(zhǔn)品和樣品。
3.沿孔壁加入各試劑,避免交叉污染。
4.本試劑盒提供的是可分拆的孔板條,使用者可以按照樣品數(shù)量選擇使用量。未用的孔板請放回原封口袋,保存在4℃??装逭埛旁诒驹噭┖信渌偷目装寮苌鲜褂?。
5.加入底物前,請確??字袥]有殘余液體。
6.終止液具有腐蝕性,請小心使用。
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Note
For Research Use Only.