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  • 產(chǎn)品名稱： Human IL-6 ELISA Kit
  • 產(chǎn)品貨號： CSK00014
  • 貨期： 現(xiàn)貨
  • 價格與訂購： 2800
  • 數(shù)量：
    庫存： 100
  • 規(guī)格：
  • 產(chǎn)品信息
  • 如何訂購
    概述（Summary）

    產(chǎn)品英文名（Product Name）

    Human IL-6 ELISA Kit

    產(chǎn)品描述（Description）

    本試劑盒采用定量雙抗夾心ELISA分析技術(shù)，將抗人IL-6單克隆抗體預(yù)先包被在酶標(biāo)板上，之后將標(biāo)準(zhǔn)品和分析樣品加入到微孔中，樣品中IL-6抗原會被預(yù)包被的抗體捕獲，清洗掉未結(jié)合的物質(zhì)后，將生物素標(biāo)記的抗人IL-6單克隆抗體加入到微孔中反應(yīng)，形成夾心復(fù)合物，再加入HRP酶標(biāo)記的親和素，清洗掉未結(jié)合的抗體及酶試劑之后，將顯色底物溶液添加到微孔中顯色，顯色強度與樣品中IL-6濃度成正比。
    本試劑盒用于測定細胞培養(yǎng)上清液、血清和血漿中人白細胞介素6（IL-6）的濃度。

    儲存條件（Storage）

    收到試劑盒后請將標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液 A、檢測溶液 B 以及預(yù)包板保存于-20℃，封板膜放置于常溫保存,其余試劑請置于 4 ℃保存?zhèn)溆谩?試劑盒按推薦溫度保存6個月，信號強度降低小于 10%。

    運輸方式（Shipping）

    藍冰運輸。

    Note

    For research use only

    使用方法（Standard Operating Procedure）
    所需設(shè)備及試劑
    ? 450 nm濾光片酶標(biāo)儀，含540 nm或570nm校正波長更佳
    ?單道或多道微量移液器，移液器槍頭
    ?去離子水
    ? 500 mL量筒
    ?樣品稀釋管或不同規(guī)格EP管
    ?吸水紙
    一、樣品收集和儲存
    1.細胞培養(yǎng)上清液：1000x g離心15分鐘，取上清檢測，或分裝后于≤-20℃冰箱保存，避免樣品反復(fù)
    凍融。
    2.血清樣本：全血室溫放置60分鐘或4℃過夜，然后1000 x g離心15分鐘，取上清檢測，或分裝后
    于≤-20℃冰箱保存，避免樣品反復(fù)凍融。
    3.血漿：使用EDTA、肝素或檸檬酸鹽作為抗凝劑收集血漿，樣品采集后30分鐘內(nèi)1000 x g離心15分
    鐘，取上清檢測，或分裝后于≤-20℃冰箱保存，避免樣品反復(fù)凍融。

    二、試劑準(zhǔn)備
    使用前將所有試劑和標(biāo)本置于室溫平衡。
    1.濃縮清洗液: 如果濃縮液中有晶體析出，加熱至室溫并輕輕混合，直到晶體完全溶解，25mL濃縮清洗液使用離子水定容至500mL，得到清洗工作液。
    2.用0.5ml標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液溶解IL-6標(biāo)準(zhǔn)品凍干粉，溶解后標(biāo)準(zhǔn)品母液濃度為1600pg/mL。震蕩混勻后靜置10分鐘，用移液槍取100μL 標(biāo)準(zhǔn)品母液至EP管中, 再取700μL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液至EP管中，得到第一個標(biāo)準(zhǔn)點200pg/mL，依次進行倍比稀釋操作得到共計7個標(biāo)準(zhǔn)點200 pg/mL、100 pg/mL、50 pg/mL、25 pg/mL、12.5pg/mL、6.25pg/mL、3.125pg/mL最后再以100ul標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液為零標(biāo)準(zhǔn)（0 pg/mL），共計8個標(biāo)準(zhǔn)點，建議每個標(biāo)準(zhǔn)點至少做2個平行孔。
    3.檢測溶液A（生物素標(biāo)記），使用前震蕩混勻后用掌上離心機瞬時離心，使液體集中于管底，臨用前取合適體積用檢測溶液稀釋液1:100稀釋至工作濃度。
    4.檢測溶液B（HRP標(biāo)記），使用前震蕩混勻后用掌上離心機瞬時離心，使液體集中于管底，臨用前取合適體積用檢測溶液稀釋液1:2000稀釋至工作濃度。
    5.顯色液: 避光保存，顯色時100μL /孔。
    6.終止液：顯色完畢后50μL /孔。

    三、使用前將所有試劑和樣品置于室溫。建議對所有標(biāo)準(zhǔn)品、對照品和樣品進行一式兩份的分析。
    1.按照前面章節(jié)的指示準(zhǔn)備所有試劑和準(zhǔn)備工作。
    2.從板架上取下多余的微孔板條，將其放回裝有干燥劑包的箔袋中，然后重新密封保存于-20℃。
    3.每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，用封板膜封住，37℃孵育60分鐘。
    4.棄去孔內(nèi)液體，每孔加入 300μL的清洗液清洗，輕微震蕩后棄去孔內(nèi)液體，將酶標(biāo)板倒扣在吸水紙
    上輕拍，使殘留在孔內(nèi)的液體全部去除，重復(fù)洗板 3 次，此過程也可采用尖嘴噴射瓶，多道移液器
    或自動洗板機來完成。
    5.每孔加入100μL檢測溶液A（生物素標(biāo)記），用新的封板膜封住，37℃孵育30分鐘。
    6.重復(fù)步驟4中的洗板程序。
    7.每孔加入100μL檢測溶液B（HRP標(biāo)記），用新的封板膜封住。37℃孵育30分鐘。
    8.重復(fù)步驟4中的洗板程序。
    9.每孔加入100μL顯色液，37℃避光顯色10分鐘。
    10.每孔加入50μL終止液，孔里的顏色應(yīng)該由藍色變至黃色，如果孔內(nèi)顏色為綠色或顏色變化不均勻，
    輕輕震動酶標(biāo)板板使顏色均一。
    11.擦干酶標(biāo)板底部水氣，立刻用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測量各孔的光密度值（O.D.值），如果波長
    校正可用，則設(shè)置為540 nm或570 nm，如果波長校正不可用，則從450 nm的讀數(shù)中減去540 nm或
    570 nm的讀數(shù)，這種修正可去除酶標(biāo)板讀數(shù)中的光學(xué)偏差，如果沒有校正波長，可直接讀取450 nm
    的讀數(shù)，但讀值有可能會更高、更不準(zhǔn)確。

    四、標(biāo)準(zhǔn)曲線制作
    每個標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的復(fù)孔平均值O.D.，減去零標(biāo)準(zhǔn)孔平均值O.D.后，以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)，O.D.值為橫坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線（R2值越趨近于1曲線越精確），然后再將樣品的平均值O.D.帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式，計算出樣品濃度。
    如果樣品已經(jīng)稀釋，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上算出的濃度須乘以稀釋系數(shù)，即為樣品的實際濃度。

    五、標(biāo)曲案例
    標(biāo)準(zhǔn)曲線僅用于演示， 每次實驗均需生成單獨的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    六、檢測范圍
    3.125pg/mL—200pg/mL

    七、最低檢測限(MDD)
    0.5pg/mL
    MDD是測試20個零標(biāo)準(zhǔn)（稀釋液）的平均O.D.值上加兩倍標(biāo)準(zhǔn)差后計算相應(yīng)的濃度來確定的。

    八、精密度
    批內(nèi)差： CV<12%
    批間差： CV<15%

    九、穩(wěn)定性
    試劑盒按推薦溫度保存6個月，信號強度降低小于 10%。

    十、回收率
    分別于培養(yǎng)基，血清和血漿樣本中加入低，中，高濃度的 IL6標(biāo)準(zhǔn)品，測定值與理論值的比率即為回收率。

    十一、線性
    分別于培養(yǎng)基，血清和血漿樣本中加入一定量的 IL6標(biāo)準(zhǔn)品，使用稀釋液倍比稀釋成 1:2，1:4，1:8，1:16 的待測樣本，稀釋后樣本中 IL6 含量的測定值與理論值的比率即為線性范圍。

    十二、實驗細節(jié)說明
    1.在試劑盒標(biāo)簽上的有效期內(nèi)使用，不要與其他廠家的試劑盒混合使用。
    2.如果樣品檢測值超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍，可使用適當(dāng)?shù)南♂屢合♂寴悠凡⒅匦聹y定，或預(yù)估樣品中IL6濃度，在實驗之前預(yù)先稀釋數(shù)個梯度同時進行測定。
    3.為避免交叉污染，不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品、試劑的加樣需更換移液槍頭，每管試劑使用單獨的容器儲存。
    4.在孵育過程中貼緊封板膜。
    5.顯色液避光保存，臨用前15分鐘從冰箱取出在室溫平衡。
    6.濃縮清洗液（20×）需使用去離子水1：20稀釋至工作濃度，去離子水不包含在試劑盒中，需實驗人員自備。
    7.終止液為酸性溶液，具有輕微腐蝕性，使用時避免接觸皮膚、眼、耳、口等暴露部位，如不慎接觸，使用大量清水沖洗后觀察接觸部位反應(yīng)，如情節(jié)嚴(yán)重請及時就醫(yī)。
    8.試劑盒酶標(biāo)板條可按需拆卸使用，已開封的試劑盒建議在1個月內(nèi)使用，未開封的試劑盒以包裝盒上保質(zhì)期為準(zhǔn)。

     

    回收率

    分別于培養(yǎng)基，血清和血漿樣本中加入低，中，高濃度的 IL6標(biāo)準(zhǔn)品，測定值與理論值的比率即為回收率。

    樣本類型

    平均回收率（%）

    回收率范圍（%）

    血清（n=5）

    92

    85-98

    EDTA 血漿 (n=5)

    93

    82-101

    肝素 血漿(n=5)

    88

    87-97

    培養(yǎng)基(n=5)

    94

    92-101

    線性

    分別于培養(yǎng)基，血清和血漿樣本中加入一定量的 IL6標(biāo)準(zhǔn)品，使用稀釋液倍比稀釋成 1:2，1:4，1:8，1:16 的待測樣本，稀釋后樣本中 IL6 含量的測定值與理論值的比率即為線性范圍。

    樣本類型

    1:2

    1:4

    1:8

    1:16

    血清（n=5）

    92-101%

    91-105%

    89-107%

    88-110%

    EDTA 血漿 (n=5)

    93-103%

    92-111%

    83-112%

    88-110%

    肝素 血漿(n=5)

    95-108%

    94-112%

    91-111%

    95-109%

    培養(yǎng)基(n=5)

    94-105%

    93-111%

    89-105%

    85-112%
    組分&說明（Component & Instruction）

    樣品名稱

    規(guī)格

    描述

    推薦儲存條件

    IL6抗體預(yù)包板

    1板

    96孔聚苯乙烯微孔板（12條*8孔），預(yù)包被抗人IL-6特異性單克隆抗體。

    密封狀態(tài)放置于-20℃保存。

    IL6標(biāo)準(zhǔn)品

    1瓶

    800pg重組人IL-6凍干粉（含防腐劑），使用前復(fù)溶于0.5mL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，終濃度為1600pg/mL。

    放置于-20℃ 保存。

    檢測溶液A

     

    1管

    120μL Biotin標(biāo)記IL-6單克隆抗體（含防腐劑），臨用前用抗體稀釋液1:100稀釋至工作濃度。

    放置于-20℃ 保存。

    檢測溶液B

     

    1管

    12μL HRP標(biāo)記的鏈酶親和素（含防腐劑），臨用前用抗體稀釋液1:2000稀釋至工作濃度。

    放置于-20℃ 保存。

    標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

    1瓶

    25 mL稀釋液（含防腐劑），用于標(biāo)準(zhǔn)品、上清、血清、血漿的稀釋。

    放置于4℃ 保存。

    檢測溶液稀釋液

    1瓶

    25 mL稀釋液（含防腐劑），用于檢測溶液A和檢測溶液B的稀釋。

    放置于4℃ 保存。

    濃縮清洗液

    1瓶

    25 mL （20×）濃度的清洗液（含防腐劑），臨用前用去離子水1:20稀釋至工作濃度。

    放置于4℃ 保存。

    顯色液

    1 瓶

    12 mL TMB（四甲基聯(lián)苯胺）。

    放置于4℃ 保存。

    終止液

    1 瓶

    6 mL 2M 酸液。

    放置于4℃ 保存。

    封板膜

    4 片

    用于實驗中封閉酶標(biāo)板。

    放置于常溫保存。