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  • 產(chǎn)品名稱： SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit(E484K,K417T,N501Y)
  • 產(chǎn)品貨號： CSK00019
  • 貨期： 現(xiàn)貨
  • 價格與訂購： 2880
  • 數(shù)量：
    庫存： 100
  • 規(guī)格：
  • 產(chǎn)品信息
  • 如何訂購
    產(chǎn)品名稱（Product Name）
    SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit(E484K,K417T,N501Y)
    貨號（Catalog#）
    CSK00019
    產(chǎn)品描述（Description）
    SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit(E484K,K417T,N501Y)基于中和抗體ELISA檢測的原理，可以檢測血清或血漿中抗SARS-CoV-2病毒的中和抗體濃度，這種抗體可以阻斷RBD(E484K,K417T,N501Y)和ACE2之間的相互作用，該試劑盒包含兩個關(guān)鍵成分：HRP標記的重組人ACE2蛋白和SARS-CoV-2病毒RBD(E484K,K417T,N501Y)蛋白。
    本試劑盒用于測定血清或血漿樣本 RBD(E484K,K417T,N501Y)中和抗體的濃度。
    穩(wěn)定性&儲存（Stability &Storage）
    收到試劑盒后請將陽性對照、陰性對照、檢測溶液 A 以及預包板保存于-20℃，封板膜放置于常溫保存,其余試劑請置于 4 ℃保存?zhèn)溆谩?/div>
    試劑盒按推薦溫度保存6個月，信號強度降低小于 10%。
    運輸方式（Shipping）
    藍冰運輸
    使用方法（Standard Operating Procedure）
    所需設(shè)備及試劑
    450 nm濾光片酶標儀，含540 nm或570nm校正波長更佳
    單道或多道微量移液器，移液器槍頭
    去離子水
    500 mL量筒
    樣品稀釋管或不同規(guī)格EP管
    吸水紙
     
    一、樣品收集與儲存
    處理所有的血液和血清，請按照NCCLS提供的處理和儲存血清和血漿樣本的建議（1990年H18-A批準的血液樣本處理和處理標準程序）。
    血清樣本：全血室溫放置60分鐘或4℃過夜，然后1000 x g離心15分鐘，取上清檢測，或分裝后于≤-20℃冰箱保存，避免樣品反復凍融。
    血漿：使用EDTA、肝素或檸檬酸鹽作為抗凝劑收集血漿，樣品采集后30分鐘內(nèi)1000 x g離心15分鐘，取上清檢測，或分裝后于≤-20℃冰箱保存，避免樣品反復凍融。
     
    二、試劑準備
    使用前將所有試劑和樣本置于室溫平衡。
    20×濃縮清洗液：如果濃縮清洗液中有晶體析出，平衡至室溫并搖勻，直到晶體完全溶解，25mL濃縮清洗液使用去離子水定容至500mL，得到清洗液。
    待測樣本：將待測樣本用樣本稀釋液按照體積比1:9稀釋，例如10μL樣本加入90μL樣本稀釋液。
    陽性對照：臨用前震蕩混勻后用掌上離心機瞬時離心，使液體集中于管底，使用樣本稀釋液1:100稀釋至工作濃度。
    陰性對照：臨用前震蕩混勻后用掌上離心機瞬時離心，使液體集中于管底，使用樣本稀釋液1:10稀釋至工作濃度。
    檢測溶液A（HRP標記）：臨用前震蕩混勻后用掌上離心機瞬時離心，使液體集中于管底，使用檢測溶液稀釋液1:2000稀釋至工作濃度。
    顯色液：避光保存，顯色時100μL /孔。室溫下孵育8?10分鐘。
    終止液：顯色完畢后50μL /孔。
     
    三、實驗步驟
    使用前將所有試劑和樣本置于室溫，建議對所有標準品、對照品和樣本進行一式兩份的分析。
    1. 按照前面章節(jié)的指示準備所有試劑和樣本。
    2. 從板架上取下多余的微孔板條，將其放回裝有干燥劑包的鋁箔袋中，然后重新密封保存于-20℃。
    3. 將稀釋的陽性對照、陰性對照和待測樣本分別與檢測溶液A按照 1:1等體積混合。例如，將100μL陽性對照與100μL檢測溶液A混合，該步驟可在96孔PCR板或者96孔Elisa板中進行。
    4. 將陽性對照混合物、陰性對照混合物和待測樣本混合物各100μL添加到對應(yīng)的酶標板孔中，用封板膜蓋好，37℃孵育1小時。
    5. 棄去孔內(nèi)液體，每孔加入 300μL的清洗液，輕微震蕩后棄去孔內(nèi)液體，將酶標板倒扣在吸水紙上輕拍，使殘留在孔內(nèi)的液體全部去除，重復洗板 5 次，此過程也可采用尖嘴噴射瓶，多道移液器或自動洗板機來完成。
    6. 每孔加入100μL顯色液，37℃避光顯色8-10分鐘。
    7. 每孔加入50μL終止液，孔里的顏色應(yīng)該由藍色變至黃色，如果孔內(nèi)顏色為綠色或顏色變化不均勻，輕輕震動酶標板使顏色均一。
    8. 擦干酶標板底部水氣，立刻用酶標儀在 450nm 波長測量各孔的O.D.值，如果波長校正可用，則設(shè)置為540 nm或570 nm，如果波長校正不可用，則從450 nm的讀數(shù)中減去540 nm或570 nm的讀數(shù)，這種修正可去除酶標板讀數(shù)中的光學偏差，如果沒有校正波長，可直接讀取450 nm的讀數(shù)，但讀值有可能不準確。
     
    四、結(jié)果判讀
    為確保結(jié)果的有效性，每次檢測必須包括陽性和陰性對照，陽性對照和陰性對照檢測OD450必須在下表所列的范圍內(nèi)，如果OD450值不符合下表要求，則試驗無效，必須重復進行。

    項目

    OD450值

    結(jié)果判斷

    陽性對照

    ＜ 0.3

    通過

    陰性對照

    ＞0.9

    通過

    用抑制率來判定樣本中抗SARS-CoV-2中和抗體的水平，判定公式如下：

     

    五、判定閾值

    項目

    閾值

    結(jié)果

    檢測結(jié)果判讀

           中和抗體檢測

    ≥20%

    陽性

    檢測到中和抗體

    ＜20%

    陰性

    未檢測到中和抗體

     
     
    六、精密度
    批內(nèi)差：CV<8%
    批間差：CV<10%
     
    七、穩(wěn)定性
    試劑盒按推薦溫度保存6個月，信號強度降低小于 10%。
     
    八、實驗細節(jié)說明
    1. 在試劑盒標簽上的有效期內(nèi)使用，不要與其他廠家的試劑盒混合使用。
    2. 如果陰性對照或陽性對照檢測OD值超出檢測范圍，可適當縮短顯色時間。
    3. 為避免交叉污染，不同標準品、樣本、試劑的加樣需更換移液槍頭，每管試劑使用單獨的容器儲存。
    4. 在孵育過程中貼緊封板膜。
    5. 顯色液避光保存，臨用前15分鐘從冰箱取出室溫平衡。
    6. 濃縮清洗液（20×）需使用去離子水1：20稀釋至工作濃度，去離子水不包含在試劑盒中，需實驗人員自備。
    7. 終止液為酸性溶液，具有輕微腐蝕性，使用時避免接觸皮膚、眼、耳、口等暴露部位，如不慎接觸，使用大量清水沖洗后觀察接觸部位反應(yīng)，如情節(jié)嚴重請及時就醫(yī)。
    8. 試劑盒酶標板條可按需拆卸使用，已開封的試劑盒建議在1個月內(nèi)使用，未開封的試劑盒所有試劑均按試劑瓶標簽上所示保存，收到試劑盒后請將陰性對照、陽性對照、檢測溶液 A以及 96 孔板保存于-20℃，其余試劑請置于 4 ℃保存?zhèn)溆谩?/span>

     

    九、常見問題解決指南

    問題

    可能原因

    解決方案

    陽性質(zhì)控讀數(shù)低或者異常

    檢測溶液A和預包板失活

    a.

    增加反應(yīng)時間或檢測試劑濃度以補償可能喪失的活性

    儀器設(shè)置錯誤

    a.

    a.

     

    檢查儀器設(shè)置

    b.

    提前一小時預熱酶標儀

    加樣錯誤

    a.

    檢查加樣步驟

    試劑過早提前準備

    a.

    確保工作液現(xiàn)配現(xiàn)用

    溫度不穩(wěn)定

     

    a.

    孵育時間和溫度參見說明書，避免反復凍融

     

    讀數(shù)背景高

    樣品中含有抑制劑

     

    a.

    加入空白孔

    b.

    保證DMSO < 1%

    洗滌不完全

    a.

    增加洗滌次數(shù)和洗液量

    緩沖液樣品污染、降解

     

    a.

    確保正確準備，使用和存儲了緩沖液和樣品

     

    讀數(shù)不穩(wěn)定

    移液或稀釋方法不一致

    a.

    校正移液器

     

    b.

     

    準備預混液以減少移液不一致

    c.

    設(shè)置平行孔以獲得更準確的結(jié)果

    孔中有氣泡

    a.

    輕震酶標板以去除氣泡

     

    讀數(shù)過高

    a.

    調(diào)整樣品濃度以達到最佳信號強度。

     

    b.

    孵育時間調(diào)整至45分鐘

     

    試劑和樣品混合不充分

    a.

    確保試劑與樣品完全混合

     

    顯色不完全

    緩沖液殘留或污染

     

    a.

    陰性對照中的顏色應(yīng)在添加TMB底物后10秒鐘內(nèi)出現(xiàn)。

    如未按上述時間顯色可考慮以下情況：

    a.在添加TMB之前確保沒有污染或殘留的緩沖液

    b.延長TMB孵育時間到15分鐘

     
    組分和說明（Component and Instruction）

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    Note
    For research use only .