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  • 產(chǎn)品名稱： Human COVID-19 Nucleocapsid (NP) IgG ELISA檢測試劑盒
  • 產(chǎn)品貨號： CSK00015
  • 貨期： 現(xiàn)貨
  • 價格與訂購： 2880
  • 數(shù)量：
    庫存： 100
  • 規(guī)格：
  • 產(chǎn)品信息
  • 如何訂購
    產(chǎn)品名稱（Product Name）
    Human COVID-19 Nucleocapsid (NP) IgG ELISA檢測試劑盒
    貨號（Catalog#）
     
    CSK00015
    產(chǎn)品描述（Description）
    本試劑盒采用間接ELISA分析技術(shù)，將N蛋白預(yù)先包被在酶標板上，之后將陽性對照樣本和分析樣本分別加入到微孔中，樣本中N蛋白抗體會和預(yù)包被的N蛋白結(jié)合，清洗掉未結(jié)合的物質(zhì)，再加入生物素標記的羊抗人二抗，清洗掉未結(jié)合的抗體，再加入HRP標記的鏈酶親和素，清洗掉未結(jié)合的酶，將顯色底物溶液添加到微孔中顯色，顯色強度與樣品中N蛋白抗體濃度成正比。
    本試劑盒用于測定血清和血漿中N蛋白抗體的濃度。
    穩(wěn)定性&儲存（Stability &Storage）
    收到試劑盒后請將陽性對照、檢測溶液A、檢測溶液B以及預(yù)包板保存于-20℃，封板膜放置于常溫保存,其余試劑請置于 4 ℃保存?zhèn)溆谩?/span>
    試劑盒按推薦溫度保存6個月，信號強度降低小于 10%。
    運輸方式（Shipping）
    藍冰運輸
    使用方法（Standard Operating Procedure）
    所需設(shè)備及試劑
    450 nm濾光片酶標儀，含540 nm或570nm校正波長更佳
    單道或多道微量移液器，移液器槍頭
    去離子水
    500 mL量筒
    樣品稀釋管或不同規(guī)格EP管
    吸水紙
     
    一、樣品收集和儲存
    1）血清樣本：全血室溫放置60分鐘或4℃過夜，然后1000 x g離心15分鐘，取上清檢測，或分裝后于≤-20℃冰箱保存，避免樣品反復(fù)凍融。
    2）血漿：使用EDTA、肝素或檸檬酸鹽作為抗凝劑收集血漿，樣品采集后30分鐘內(nèi)1000 x g離心15分鐘，取上清檢測，或分裝后于≤-20℃冰箱保存，避免樣品反復(fù)凍融。
     
    二、試劑準備
    使用前將所有試劑和標本置于室溫平衡。
    1.濃縮清洗液: 如果濃縮液中有晶體析出，加熱至室溫并輕輕混合，直到晶體完全溶解，25mL濃縮清洗液使用離子水定容至500mL，得到清洗工作液。
    2.陽性對照標準點配置，陽性對照濃度為1mg/mL, 使用樣本稀釋液1:10000稀釋陽性對照得到第一個標準點100ng/mL，依次進行倍比稀釋操作得到共計7個標準點50 ng/mL、25 ng/mL、12.5 ng/mL、6.25 ng/mL、3.125ng/mL、1.5625ng/mL、最后再以100ul樣本稀釋液為零標準（0 ng/mL），共計8個標準點，建議每個標準點至少做2個平行孔。
    3.血清，血漿樣本配置：使用樣本稀釋液1:1000稀釋后上樣。
    4.檢測溶液A工作液配置，震蕩混勻后用掌上離心機瞬時離心，使液體集中于管底，臨用前取合適體積用檢測溶液稀釋液1:1000稀釋至工作濃度。
    5.檢測溶液B工作液配置，震蕩混勻后用掌上離心機瞬時離心，使液體集中于管底，臨用前取合適體積用檢測溶液稀釋液1:2000稀釋至工作濃度。
    6.顯色液: 避光保存，顯色時100μL /孔。
    7.終止液：顯色完畢后50μL /孔。
     
    三、實驗步驟
    使用前將所有試劑和樣品置于室溫。建議對所有標準品、對照品和樣品進行一式兩份的分析。
    1. 按照前面章節(jié)的指示準備所有試劑和準備工作。
    2. 從板架上取下多余的微孔板條，將其放回裝有干燥劑包的箔袋中，然后重新密封保存于-20℃。
    3. 每孔加入100μL 陽性對照（共計8點）和待測樣本，用封板膜封住，37℃孵育60分鐘。
    4. 棄去孔內(nèi)液體，每孔加入 300μL的清洗液清洗，輕微震蕩后棄去孔內(nèi)液體，將酶標板倒扣在吸水紙上輕拍，使殘留在孔內(nèi)的液體全部去除，重復(fù)洗板 3 次，此過程也可采用尖嘴噴射瓶，多道移液器或自動洗板機來完成。
    5. 每孔加入100μL檢測溶液A工作液（生物素標記），用新的封板膜封住，37℃孵育30分鐘。
    6. 重復(fù)步驟4中的洗板程序。
    7. 每孔加入100μL檢測溶液B工作液（HRP標記），用新的封板膜封住。37℃孵育30分鐘。
    8. 重復(fù)步驟4中的洗板程序。
    9. 每孔加入100μL顯色液，37℃避光顯色10分鐘。
    10. 每孔加入50μL終止液，孔里的顏色應(yīng)該由藍色變至黃色，如果孔內(nèi)顏色為綠色或顏色變化不均勻，輕輕震動酶標板板使顏色均一。
    11. 擦干酶標板底部水氣，立刻用酶標儀在 450nm 波長測量各孔的光密度值（O.D.值），如果波長校正可用，則設(shè)置為540 nm或570 nm，如果波長校正不可用，則從450 nm的讀數(shù)中減去540 nm或570 nm的讀數(shù)，這種修正可去除酶標板讀數(shù)中的光學(xué)偏差，如果沒有校正波長，可直接讀取450 nm的讀數(shù)，但讀值有可能會更高、更不準確。
     
    四、標準曲線制作
    取每個陽性對照和樣本的復(fù)孔平均值O.D.，減去零標準孔平均值O.D.后，以陽性對照的濃度為橫坐標，O.D.值為縱坐標，繪出標準曲線（R2值越趨近于1曲線越精確），然后再將樣品的平均值O.D.帶入標準曲線的回歸方程式，計算出樣品中目標蛋白濃度。
    如果樣品已經(jīng)稀釋，從標準曲線上算出的濃度須乘以稀釋系數(shù)，即為樣品的實際濃度。
     
     
    五、精密度
    批內(nèi)差： CV<12%
    批間差： CV<15%
     
    六、穩(wěn)定性
    試劑盒按推薦溫度保存6個月，信號強度降低小于 10%。
     
    七、實驗細節(jié)說明
    1. 在試劑盒標簽上的有效期內(nèi)使用，不要與其他廠家的試劑盒混合使用。
    2. 如果樣本檢測值超出標準曲線范圍，可使用適當?shù)南♂屢合♂寴悠凡⒅匦聹y定，或預(yù)估樣品中抗體濃度，在實驗之前預(yù)先稀釋數(shù)個梯度同時進行測定。
    3. 為避免交叉污染，不同標準品、樣品、試劑的加樣需更換移液槍頭，每管試劑使用單獨的容器儲存。
    4. 在孵育過程中貼緊封板膜。
    5. 顯色液避光保存，臨用前15分鐘從冰箱取出在室溫平衡。
    6. 濃縮清洗液（20×）需使用去離子水1：20稀釋至工作濃度，去離子水不包含在試劑盒中，需實驗人員自備。
    7. 終止液為酸性溶液，具有輕微腐蝕性，使用時避免接觸皮膚、眼、耳、口等暴露部位，如不慎接觸，使用大量清水沖洗后觀察接觸部位反應(yīng)，如情節(jié)嚴重請及時就醫(yī)。
    8. 試劑盒酶標板條可按需拆卸使用，已開封的試劑盒建議在1個月內(nèi)使用，未開封的試劑盒以包裝盒上保質(zhì)期為準。
    組分和說明（Component and Instruction）

    樣品清單及儲存條件

    樣品名稱

    規(guī)格

    描述

    推薦儲存條件

    N蛋白預(yù)包板

    1 板

    96孔聚苯乙烯微孔板（12條*8孔），預(yù)包被N蛋白。

    密封狀態(tài)放置于-20℃保存。

    濃縮清洗液

    1 瓶

    25 mL （20×）濃度的清洗液（含防腐劑），臨用前用去離子水1:20稀釋至工作濃度。 

    放置于4℃ 保存。

    陽性對照

    1瓶

    12μL重組人源N蛋白抗體，濃度1mg/mL。

    放置于-20℃ 保存。

    檢測溶液A

    1 瓶

    12μL 生物素標記的羊抗人二抗，臨用前用檢測溶液稀釋液1:1000稀釋至工作濃度。

    放置于-20℃ 保存。

    檢測溶液B

    1 瓶

    12μL HRP標記的鏈酶親和素，臨用前用檢測溶液稀釋液1:2000稀釋至工作濃度。

    放置于-20℃ 保存。

    樣本稀釋液

    1 瓶

    25 mL稀釋液（含防腐劑），用于陽性對照、血清、血漿的稀釋。

    放置于4℃ 保存。

    檢測溶液稀釋液

    1 瓶

    25 mL稀釋液（含防腐劑），用于檢測溶液A，檢測溶液B的稀釋。

    放置于4℃ 保存。

    顯色液

    1 瓶

    12 mL TMB（四甲基聯(lián)苯胺）。

    放置于4℃ 保存。

    終止液

    1 瓶

    6 mL 2M 酸液。

    放置于4℃ 保存。

    封板膜

    4 片

    用于實驗中封閉酶標板。

    放置于常溫保存。

     
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    Note
    For research use only .