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- 產(chǎn)品名稱： 熒光素Fluor594標(biāo)記試劑盒
- 產(chǎn)品貨號(hào)： CSL0540
- 貨期： 現(xiàn)貨
- 價(jià)格與訂購(gòu)： 2800
- 數(shù)量：
庫(kù)存： 100
- 規(guī)格： 一盒
- 產(chǎn)品信息
- 如何訂購(gòu)
1．產(chǎn)品背景
Fluor熒光染料為活性熒光染料，該系列包括從紫外、可見(jiàn)光譜到近紅外光譜常見(jiàn)熒光染料，用于標(biāo)記生物分子，特別是蛋白質(zhì)和核酸。對(duì)核心結(jié)構(gòu)的創(chuàng)新性修改使得 Fluor染料優(yōu)于具有許多創(chuàng)新新穎特征的其他商業(yè)染料，主要表現(xiàn)在標(biāo)記效率更高，發(fā)光度更強(qiáng)。
Fluor594是一種熒光染料，其激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為587nm和603nm，它與抗體形成更特異的抗體熒光素結(jié)合物，背景較更低。
2．基本原理
本試劑盒主要通過(guò)熒光素集團(tuán)的活性鍵與生物分子的游離氨基共價(jià)結(jié)合，可以用于標(biāo)記抗體，蛋白，多肽或者核酸。本試劑盒種所提供的熒光染料都為預(yù)先活化，可以直接用于標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。標(biāo)記產(chǎn)物可以放置在 4?C至少保存6個(gè)月以上。
本試劑盒常常被用于一抗的直接標(biāo)記，主要優(yōu)點(diǎn)是省卻了二抗的使用和其所帶來(lái)的操作步驟。
二、主要信息
1．試劑盒已經(jīng)提供的材料：
活化的 Fluor594溶液: 已活化，可直接用于標(biāo)記 1支.
Fluor594標(biāo)記緩沖液: 優(yōu)化最適標(biāo)記反應(yīng). 1 支.
純化超濾管: 1支.
注意：試劑盒中所配超濾管標(biāo)示的截留分子量必須小于待標(biāo)記分子分子量2倍以上
· 100 μg (1 x 100 μg), 可以用于50μg-150μg抗體標(biāo)記1次，最佳標(biāo)記量為100μg。
· 300 μg (300 μg), 可以用于150μg-450μg抗體標(biāo)記1次，每次最佳標(biāo)記量為450μg。
· 1mg (1 x 1mg), 可以用于500μg-1500μg抗體標(biāo)記1次，每次最佳標(biāo)記量為1000μg。
2．其他需要自備材料：
? 待標(biāo)記的生物分子
? 移液器及吸頭.
? 去離子水.
? PBS (pH 7.4)
3．試劑盒儲(chǔ)存
試劑盒放在-20?C可保存6個(gè)月以上。.
三、試劑盒使用操作流程
1．試劑準(zhǔn)備
待標(biāo)記的生物分子與熒光素最佳摩爾比例為1:8-1:22,本試劑盒推薦最佳比例為1:15； 為了獲得最佳的摩爾比例，可以要通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行摸索。以抗體標(biāo)記為例，推薦量如下。最佳標(biāo)記體系應(yīng)保證抗體的濃度為2mg/ml，標(biāo)記時(shí)終濃度不低于1mg/ml。對(duì)于其他標(biāo)記量，參照表按等比例調(diào)整抗體的體積和用量。
| 試劑盒規(guī)格 | 抗體標(biāo)記量 | 最適標(biāo)記體積 | |
| 100 μg /Kit | 50-150 μg | 25-75 μl | |
| 1 mg/Kit | 0.5-1.5 mg | 250-750 μl |
2．樣品準(zhǔn)備
待標(biāo)記的分子濃度不低于2 mg/ml，如果濃度較低，需在實(shí)驗(yàn)之前濃縮到2mg/ml以上；待標(biāo)記的分子需要溶解在符合以下要求的緩沖液中，如果符合以下要求可以直接進(jìn)行標(biāo)記，如果不符合請(qǐng)將溶液置換（透析或者超濾）到符合要求的溶液中在進(jìn)行標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。
| pH | 6.5-8.0 |
| 不含游離氨基 | MES, PBS, HEPES |
| 螯合劑 (e.g. EDTA) | ü |
| 甘油 | < 5% |
| 牛血清白蛋白 | ? |
| 甘氨酸 | ? |
| 含氨基組分 | ? |
溶液中一定不能含有游離氨基，否則會(huì)影響標(biāo)記效率。
3．操作流程(以標(biāo)記100ug抗體為例,2mg/ml)
1). 取5 μl Fluor594標(biāo)記緩沖液，加入到上述準(zhǔn)備好的待標(biāo)記抗體溶液中，用移液器輕輕混勻
2). 打開(kāi)活化的 Fluor594溶液蓋子，取2.5 μl加入到步驟1的溶液中，去離子水補(bǔ)足到50 μl，輕輕混勻，37°C 避光反應(yīng)1小時(shí)。
3). 反應(yīng)完畢，將適量的PBS（約450u L）加入到步驟2的混合溶液中，輕輕混勻并將溶液移至超濾管，4°C 12000離心10min。
4) .將超濾管芯內(nèi)溶液輕輕混勻并吹打管心內(nèi)壁，并轉(zhuǎn)移到一干凈離心管中即為熒光素標(biāo)記產(chǎn)物。
4．標(biāo)記產(chǎn)物的保存
根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要調(diào)整到合適的濃度，可加入適量BSA，甘油及防腐劑等，分裝成小分-20°C避光保存。
四、技術(shù)支持
常見(jiàn)問(wèn)題及解決辦法
Q: 待標(biāo)記分子經(jīng)過(guò)濃縮濃度仍然達(dá)不到2 mg/ml，再濃縮就產(chǎn)生沉淀了怎么辦?
A: 標(biāo)記的時(shí)候盡可能達(dá)到這個(gè)濃度，如果實(shí)在達(dá)不到這個(gè)濃度，步驟2不需要再補(bǔ)足去離子水，適當(dāng)增加加入的活化的熒光素的量；最佳標(biāo)記效果可以梯度增加熒光素用量試驗(yàn)測(cè)試來(lái)確定。
Q: 待標(biāo)記分子與熒光素的最佳摩爾比只能是1:8 - 1:22之間？
A: 這個(gè)要根據(jù)不同生物分子性質(zhì)確定，更準(zhǔn)確的說(shuō)與生物分子表面氨基個(gè)數(shù)有關(guān)系；最佳標(biāo)記比例可根據(jù)梯度用量測(cè)試確定。
Q: 如果選擇標(biāo)記試劑盒中的超濾管型號(hào)?
A: 一般來(lái)說(shuō)，您待標(biāo)記生物分子的分子量是超濾管截留分子量的2倍以上最好；比如，標(biāo)記抗體，抗體分子量為150Kd,選擇分子截留75kD以下的都可以，分子量截留越小，超濾越慢。如果分子量太小，標(biāo)記完以后建議用更高精度的純化方式，比如，10kD分子量建議用HPLC純化
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