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產(chǎn)品介紹

本試劑盒采用先進(jìn)的硅膠膜吸附技術(shù)，高效專一地結(jié)合質(zhì)粒DNA，操作簡單、快速。僅需20min 。3-5mL可提取多至20μg 的質(zhì)粒DNA。

產(chǎn)品特點(diǎn)

本試劑盒提取的質(zhì)粒DNA 可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測序、連接、轉(zhuǎn)化、文庫篩選、體外翻譯、轉(zhuǎn)染一些常規(guī)的傳代細(xì)胞等。

內(nèi)裝

操作步驟

1.挑取菌落于3-5ml含有抗生素的LB培養(yǎng)基中37℃振蕩培養(yǎng)18-24小時(shí)。

注意:在有氨芐抗性的LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)建議不超過20小時(shí);若為-80℃甘油凍存的菌液，請先涂板后挑取新的菌落進(jìn)行培養(yǎng)。

2.收集菌液至1.5ml離心管中，12000rpm離心2分鐘，棄上清。

注意:菌液較多時(shí)可通過多次離心將菌體沉淀于離心管中，盡量將上清吸除干凈;菌體量不宜過多，否則會(huì)造成菌體裂解不充分。

3.加入250ulC1溶液(請先加入RNaseA)，重懸菌體。

注意:建議用1ml移液器重懸菌體并充分混勻，有條件時(shí)使用渦旋振蕩器徹底懸浮菌體;已加入RNaseA的C1溶液應(yīng)于4℃保存。

4.沿管壁加入250ulC2溶液，上下輕柔顛倒3次，室溫靜置3分鐘。

注意:切忌劇烈振蕩;靜置時(shí)間不應(yīng)超過5分鐘，以免造成DNA斷裂。

5.加入350ulC3溶液，上下顛倒7-8次，充分混勻，此時(shí)會(huì)出現(xiàn)白色絮狀沉淀。

注意:C3溶液加入后應(yīng)立即混勻，避免形成局部沉淀;切忌混勻時(shí)劇烈振蕩。

6室溫12000rpm離心10分鐘，小心的將上清轉(zhuǎn)移至吸附柱中(吸附柱放入收集管中)。

注意:離心采取最高速，轉(zhuǎn)速不小于12000rpm，時(shí)間不得小于10分鐘;吸取上清時(shí)避免吸到白色沉淀，若上清中還有微小白色沉淀可再次高速離心后取上清。

7裝有上清的吸附柱室溫12000rpm離心30秒，棄掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

8.向吸附柱中加入500ulCB溶液(請先加入無水乙醇)，室溫12000rpm離心30秒，棄掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

注意:加入的無水乙醇比例低可能會(huì)將DNA部分洗脫掉，影響質(zhì)粒提取得率。

9.重復(fù)步驟8一次。

注意:此步驟目的是洗去吸附柱上的鹽和其他離子，不應(yīng)省略。

10.室溫12000rpm離心2分鐘，徹底去除吸附柱中的漂洗液，丟棄收集管，將吸附柱置于一個(gè)新的離心管中。

11開蓋室溫靜置5分鐘，向吸附柱中間部位的吸附膜滴加30-50uEB溶液。

注意:乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)，一定要將乙醇揮發(fā)干凈。

12.扣蓋室溫靜置5分鐘，室溫12000rpm離心2分鐘將質(zhì)粒溶液收集至離心管中。

注意:可將收集的質(zhì)粒溶液再次加入至吸附柱中離心，也可將EB溶液溫浴至70℃后再進(jìn)行洗脫，以提高質(zhì)粒回收濃度;洗脫液的pH值會(huì)影響洗脫效率，若用水洗脫，應(yīng)確保水的pH值在70-8.5范圍內(nèi)。

5ml菌液質(zhì)粒提取得率參考表

質(zhì)粒的檢測

實(shí)驗(yàn)室常用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒純度，出現(xiàn)2條或3條帶時(shí)可能為質(zhì)粒的開環(huán)，線性，超螺旋結(jié)構(gòu)。

測質(zhì)粒濃度時(shí)，OD₂₆₀/OD₂₈₀比值應(yīng)在1.7-1.9范圍內(nèi)，1.8為最佳，低于1.8表明可能有蛋白質(zhì)污染，大于1.9表明可能有RNA污染。

Note

For research use only .

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