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- 產(chǎn)品名稱: 去內(nèi)毒素質(zhì)粒小提試劑盒
- 產(chǎn)品貨號: CSHZPEFK50-I
- 貨期: 現(xiàn)貨
- 價(jià)格與訂購: 600
- 數(shù)量:
- 規(guī)格: 50T
- 產(chǎn)品信息
- 如何訂購
產(chǎn)品介紹
本試劑盒采用獨(dú)特的硅膠膜吸附技術(shù),高效專一地結(jié)合質(zhì)粒DNA,同時(shí)采用特殊的去內(nèi)毒素系統(tǒng),可有效的去除內(nèi)毒素和蛋白等雜質(zhì)。整個(gè)提取過程僅需30min,方便快捷。
產(chǎn)品特點(diǎn)
快速高產(chǎn):30min左右提取20μg 質(zhì)粒。
內(nèi)裝
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 用途 | 儲(chǔ)存條件 |
RNaseA(10mg/ml) | 100μl | 去除RNA | 4℃可保存3個(gè)月, -20℃可保存6個(gè)月 |
C1溶液 | 15ml | 重懸菌體 | 25-30℃可保存6個(gè)月 |
C2溶液 | 15ml | 裂解菌體 | 25-30℃可保存6個(gè)月 |
C3溶液 | 20ml | 形成沉淀 | 25-30℃可保存6個(gè)月 |
CER溶液 | 30ml | 去除部分蛋白和內(nèi)毒素 25-30℃ | 可保存6個(gè)月 |
CB溶液 | 11ml | 漂洗,脫鹽(使用前加入44ml無水乙醇 | 25-30℃可保存6個(gè)月 |
EB溶液 | 5ml | 洗脫質(zhì)粒 | 25-30℃可保存6個(gè)月 |
吸附柱 | 50個(gè) | 結(jié)合質(zhì)粒 | 干燥避光下保存12個(gè)月 |
收集管(2ml) | 50個(gè) | 收集吸附柱離心后的液體 | 干燥避光下保存12個(gè)月 |
操作步驟
1.挑取菌落于3-5ml含有抗生素的LB培養(yǎng)基中37℃振蕩培養(yǎng)18-24小時(shí)。
注意:在有氨芐抗性的LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)建議不超過20小時(shí);若為-80℃甘油凍存的菌液,請先涂板后挑取新的菌落進(jìn)行培養(yǎng)。
2.收集菌液至15ml離心管中,12000rpm離心2分鐘,棄上清。
注意:菌液較多時(shí)可通過多次離心將菌體沉淀于離心管中,盡量將上清吸除干凈;菌體量不宜過多,否則會(huì)造成菌體裂解不充分。
3.加入250ulC1溶液(請先加入RNaseA),重懸菌體。
注意:建議用1ml移液器重懸菌體并充分混勻,有條件時(shí)使用渦旋振蕩器徹底懸浮菌體;已加入RNaseA的C1溶液應(yīng)于4℃保存。
4.沿管壁加入250ulC2溶液,上下輕柔顛倒3次,室溫靜置3分鐘。
注意:切忌劇烈振蕩;靜置時(shí)間不應(yīng)超過5分鐘,以免造成DNA斷裂。
5.加入350ulC3溶液,上下顛倒7-8次,充分混勻,此時(shí)會(huì)出現(xiàn)白色絮狀沉淀。
注意:C3溶液加入后應(yīng)立即混勻,避免形成局部沉淀;切忌混勻時(shí)劇烈振蕩。
6.室溫12000rpm離心10分鐘,小心的將上清轉(zhuǎn)移至吸附柱中(吸附柱放入收集管中)。
注意:離心采取最高速,轉(zhuǎn)速不小于12000rpm,時(shí)間不得小于10分鐘;吸取上清時(shí)避免吸到白色沉淀,若上清中還有微小白色沉淀可再次高速離心后取上清。
7裝有上清的吸附柱室溫12000rpm離心30秒,棄掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
8.向吸附柱中加入500ulCER溶液,室溫靜置1分鐘,12000rpm離心30秒,棄掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
9.向吸附柱中加入500uCB溶液(請先加入無水乙醇),室溫12000rpm離心30秒,棄掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
注意:加入的無水乙醇比例低可能會(huì)將DNA部分洗脫掉,影響質(zhì)粒提取得率。
10重復(fù)步驟9一次。
注意:此步驟目的是洗去吸附柱上的鹽和其他離子,不應(yīng)省略。
11.室溫12000rpm離心2分鐘,徹底去除吸附柱中的漂洗液,丟棄收集管,將吸附柱置于一個(gè)新的離心管中。
12開蓋室溫靜置5分鐘,向吸附柱中間部位的吸附膜滴加30-50ulEB溶液。
注意:乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn),一定要將乙醇揮發(fā)干凈。
13扣蓋室溫靜置5分鐘,室溫12000rpm離心2分鐘將質(zhì)粒溶液收集至離心管中。
注意:可將收集的質(zhì)粒溶液再次加入至吸附柱中離心,也可將EB溶液溫浴至70℃后再進(jìn)行洗脫,以提高質(zhì)?;厥諠舛?洗脫液的pH值會(huì)影響洗脫效率,若用水洗脫,應(yīng)確保水的pH值在70-85范圍內(nèi)。
5ml菌液質(zhì)粒提取得率參考表
質(zhì)粒類型 | 質(zhì)粒提取得率 |
高拷貝 | 15-25ug |
中拷貝 | 10-20ug |
低拷貝 | 5-10μg |
質(zhì)粒的檢測
實(shí)驗(yàn)室常用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒純度,出現(xiàn)2條或3條帶時(shí)可能為質(zhì)粒的開環(huán),線性,超螺旋結(jié)構(gòu)。
測質(zhì)粒濃度時(shí),OD260/OD280比值應(yīng)在1.7-1.9范圍內(nèi),1.8為最佳,低于1.8表明可能有蛋白質(zhì)污染,大于1.9表明可能有RNA污染。
Note
For research use only .
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