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- 產(chǎn)品名稱： SARS-CoV-2 (2019-nCoV) S-RBD ELISA Kit
- 產(chǎn)品貨號(hào)： CSK00012
- 貨期： 現(xiàn)貨
- 價(jià)格與訂購(gòu)： 2880
- 數(shù)量：
庫存： 100
- 規(guī)格：
- 產(chǎn)品信息
- 如何訂購(gòu)
產(chǎn)品名稱（Product Name）
SARS-CoV-2 (2019-nCoV) S-RBD ELISA Kit
貨號(hào)（Catalog#）
CSK00012
產(chǎn)品描述（Description）
本試劑盒采用雙抗夾心ELISA定量分析技術(shù)，將抗RBD蛋白單克隆抗體預(yù)先包被在酶標(biāo)板上，之后將標(biāo)準(zhǔn)品或分析樣本加入到微孔中，樣本中RBD蛋白會(huì)被預(yù)包被的抗體捕獲，清洗掉未結(jié)合的物質(zhì)后，將生物素標(biāo)記的抗RBD蛋白單克隆抗體加入到微孔中反應(yīng)，形成夾心復(fù)合物，再加入HRP標(biāo)記的鏈霉親和素，清洗掉未結(jié)合的抗體及酶試劑之后，將顯色底物溶液添加到微孔中顯色，顯色強(qiáng)度與樣品中RBD蛋白濃度成正比。
本試劑盒用于測(cè)定支氣管肺泡灌洗液、鼻咽拭子樣本中RBD蛋白的濃度。
穩(wěn)定性&儲(chǔ)存（Stability &Storage）
收到試劑盒后請(qǐng)將標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液 A、檢測(cè)溶液 B 以及預(yù)包板保存于-20℃，封板膜放置于常溫保存,其余試劑請(qǐng)置于 4 ℃保存?zhèn)溆谩?/span>
試劑盒按推薦溫度保存6個(gè)月，信號(hào)強(qiáng)度降低小于 10%。
運(yùn)輸方式（Shipping）
藍(lán)冰運(yùn)輸
使用方法（Standard Operating Procedure）
所需設(shè)備及試劑
?450 nm濾光片酶標(biāo)儀，含540 nm或570nm校正波長(zhǎng)更佳
?單道或多道微量移液器，移液器槍頭
?去離子水
? 500 mL量筒
?樣品稀釋管或不同規(guī)格EP管
?吸水紙
一、試劑準(zhǔn)備
使用前將所有試劑和樣本置于室溫平衡。
20×濃縮清洗液： 如果濃縮液中有晶體析出，加熱至室溫并輕輕混合，直到晶體完全溶解，25mL濃縮清洗液使用去離子水定容至500mL，得到清洗工作液。
標(biāo)準(zhǔn)品：用1mL樣本稀釋液溶解RBD蛋白標(biāo)準(zhǔn)品凍干粉，溶解后標(biāo)準(zhǔn)品母液濃度為8000pg/mL。震蕩混勻后靜置10分鐘，然后進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋，將標(biāo)準(zhǔn)品母液使用樣本稀釋液10倍稀釋得到第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)800pg/mL，依次進(jìn)行倍比稀釋操作得到共計(jì)7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)800 pg/mL、 400 pg/mL、200 pg/mL、100 pg/mL、50 pg/mL、25 pg/mL、12.5pg/mL、最后再以100ul樣本稀釋液為零標(biāo)準(zhǔn)（0 pg/mL），共計(jì)8個(gè)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)，建議每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)至少做2個(gè)平行孔。
檢測(cè)溶液A（生物素標(biāo)記）：震蕩混勻后用掌上離心機(jī)瞬時(shí)離心，使液體集中于管底，臨用前取合適體積用檢測(cè)溶液稀釋液1:2000稀釋至工作濃度。
檢測(cè)溶液B（HRP標(biāo)記）：震蕩混勻后用掌上離心機(jī)瞬時(shí)離心，使液體集中于管底，臨用前取合適體積用檢測(cè)溶液稀釋液1:2000稀釋至工作濃度。
顯色液: 避光保存，顯色時(shí)100μL /孔。
終止液：顯色完畢后50μL /孔。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
使用前將所有試劑和樣本置于室溫，建議對(duì)所有標(biāo)準(zhǔn)品和樣本進(jìn)行一式兩份的分析
1. 按照前面章節(jié)的指示準(zhǔn)備所有試劑和準(zhǔn)備工作。
2. 從板架上取下多余的微孔板條，將其放回裝有干燥劑包的箔袋中，然后重新密封保存于-20℃。
3. 每孔加入100μL 稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品（共計(jì)8點(diǎn)）和待測(cè)樣本，用封板膜封住，37℃孵育60分鐘。
4. 棄去孔內(nèi)液體，每孔加入 300μL的清洗工作液，輕微震蕩后棄去孔內(nèi)液體，將酶標(biāo)板倒扣在吸水紙上輕拍，使殘留在孔內(nèi)的液體全部去除，重復(fù)洗板3次，此過程也可采用尖嘴噴射瓶，多道移液器或自動(dòng)洗板機(jī)來完成。
5. 每孔加入100μL檢測(cè)溶液A工作液（生物素標(biāo)記），用新的封板膜封住，37℃孵育60分鐘。
6. 重復(fù)步驟4中的洗板程序。
7. 每孔加入100μL檢測(cè)溶液B工作液（HRP標(biāo)記），用新的封板膜封住，37℃孵育30分鐘。
8. 重復(fù)步驟4中的洗板程序。
9. 每孔加入100μL顯色液，室溫避光顯色10分鐘。
10. 每孔加入50μL終止液，孔里的顏色應(yīng)該由藍(lán)色變至黃色，如果孔內(nèi)顏色為綠色或顏色變化不均勻，輕輕震動(dòng)酶標(biāo)板板使顏色均一。
11. 擦干酶標(biāo)板底部水氣，立刻用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度值（O.D.值），如果波長(zhǎng)校正可用，則設(shè)置為540 nm或570 nm，如果波長(zhǎng)校正不可用，則從450 nm的讀數(shù)中減去540 nm或570 nm的讀數(shù)，這種修正可去除酶標(biāo)板讀數(shù)中的光學(xué)偏差，如果沒有校正波長(zhǎng)，可直接讀取450 nm的讀數(shù)，但讀值有可能會(huì)更高、更不準(zhǔn)確。
三、標(biāo)準(zhǔn)曲線制作
取每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的復(fù)孔平均值O.D.，減去零標(biāo)準(zhǔn)孔平均值O.D.后，以陽性對(duì)照的濃度為橫坐標(biāo)，O.D.值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線（R2值越趨近于1曲線越精確），然后再將樣本的平均值O.D.帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式，計(jì)算出樣本中目標(biāo)蛋白濃度。
如果樣本已經(jīng)稀釋，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上算出的濃度須乘以稀釋系數(shù)，即為樣本中目標(biāo)蛋白的實(shí)際濃度。
四、標(biāo)曲案例
標(biāo)準(zhǔn)曲線僅用于演示，每次實(shí)驗(yàn)均需生成單獨(dú)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
五、檢測(cè)范圍
12.5pg/mL—800pg/mL
六、最低檢測(cè)限(MDD)
10pg/mL
MDD是測(cè)試20個(gè)零標(biāo)準(zhǔn)（稀釋液）的平均O.D.值上加兩倍標(biāo)準(zhǔn)差后計(jì)算相應(yīng)的濃度來確定的。
七、精密度
批內(nèi)差： CV<12%
批間差： CV<15%
八、穩(wěn)定性
試劑盒按推薦溫度保存6個(gè)月，信號(hào)強(qiáng)度降低小于 10%。
九、實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)說明
1. 在試劑盒標(biāo)簽上的有效期內(nèi)使用，不要與其他廠家的試劑盒混合使用。
2. 如果樣本檢測(cè)值超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍，可適當(dāng)調(diào)整稀釋倍數(shù)并重新測(cè)定，或預(yù)估樣本中蛋白濃度，在實(shí)驗(yàn)之前預(yù)先稀釋數(shù)個(gè)梯度同時(shí)進(jìn)行測(cè)定。
3. 為避免交叉污染，不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣本、試劑的加樣需更換移液槍頭，每管試劑使用單獨(dú)的容器儲(chǔ)存。
4. 在孵育過程中貼緊封板膜。
5. 顯色液避光保存，臨用前15分鐘從冰箱取出在室溫平衡。
6. 濃縮清洗液（20×）需使用去離子水1：20稀釋至工作濃度，去離子水不包含在試劑盒中，需實(shí)驗(yàn)人員自備。
7. 終止液為酸性溶液，具有輕微腐蝕性，使用時(shí)避免接觸皮膚、眼、耳、口等暴露部位，如不慎接觸，使用大量清水沖洗后觀察接觸部位反應(yīng)，如情節(jié)嚴(yán)重請(qǐng)及時(shí)就醫(yī)。
8. 試劑盒酶標(biāo)板條可按需拆卸使用，已開封的試劑盒建議在1個(gè)月內(nèi)使用，未開封的試劑盒所有試劑均按試劑瓶標(biāo)簽上所示保存，收到試劑盒后請(qǐng)將標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液 A、檢測(cè)溶液 B、以及預(yù)包板保存于-20℃，其余試劑請(qǐng)置于 4 ℃保存?zhèn)溆谩?/span>
十、常見問題解決指南
| 問題 | 原因 | 解決方案 |
| 標(biāo)準(zhǔn)曲線差 | 移液不精確 | 檢查和校正移液器 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備不正確 | 進(jìn)行正確的標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋 | |
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O.D 值低 | 孵育時(shí)間太短 | 保證充足的孵育時(shí)間 |
| 溫度不正確 | 試劑平衡至室溫并保證孵育溫度正確 | |
| 試劑體積不正確 | 檢查移液器并確保加樣體積與說明書一致 | |
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精密度低 | 移液不精確 | 檢查和校正移液器 |
| 混勻不充分 | 充分混勻和吸取試劑 | |
| 洗滌不充分 | 按說明書要求充分洗滌和浸泡 | |
| 背景值高 | 洗滌不充分 | 按說明書要求充分洗滌和浸泡 |
| 清洗液污染 | 重新配置清洗液 | |
| 靈敏度低 | 試劑盒儲(chǔ)存不當(dāng) | 試劑盒短期整體保存于4℃，長(zhǎng)期保存根據(jù)說明書分開保存各組分 |
組分和說明（Component and Instruction）
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Note
For research use only .
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