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  • 產(chǎn)品名稱： 藻紅蛋白抗體標(biāo)記試劑盒
  • 產(chǎn)品貨號(hào)：
  • 貨期： 0
  • 價(jià)格與訂購(gòu)： 2800
  • 數(shù)量：
    庫(kù)存： 100
  • 規(guī)格： 一盒
  • 產(chǎn)品信息
  • 如何訂購(gòu)

    產(chǎn)品介紹：

    藻紅蛋白（R-phycoerythrin ,R-PE）是從紅藻中分離提純的一種熒光蛋白，最大激發(fā)波長(zhǎng)為565nm，最大熒光發(fā)射峰為575nm。，由于其吸光度和熒光量產(chǎn)率很高，熒光強(qiáng)而穩(wěn)定，靈敏度高備受免疫檢測(cè)標(biāo)記領(lǐng)域青睞。R-PE蛋白的亞基組成為（αβ）6γ，每個(gè)α、β亞基分子量為20KDa，每個(gè)γ亞基分子量為30KDa,總分子量為240kDa。目前還沒有辦法通過重組蛋白表達(dá)量產(chǎn)，只能從紅藻中提取，因此其生產(chǎn)成本制約其廣泛使用。

     

     

    基本原理：

    本試劑盒利用抗體和R-PE上游離的氨基，采用定向?qū)优悸?lián)技術(shù)將抗體分子與R-PE共價(jià)偶聯(lián)，本試劑盒采用加長(zhǎng)臂方案，使被標(biāo)記抗體與熒光蛋白之間有一定長(zhǎng)度柔性連接臂，避免由于位阻妨礙抗體活性或者熒光蛋白發(fā)光效率。

    主要特點(diǎn)：

    ü  試劑盒組分齊全，操作簡(jiǎn)單，只要按照操作步驟進(jìn)行便可得到高品質(zhì)R-PE偶聯(lián)抗體；

    ü  本試劑盒所配置的R-PE為高純度，高活性熒光蛋白，熒光發(fā)光效率更高；

    ü  本試劑采用定向偶聯(lián)技術(shù)，熒光蛋白和抗體都不會(huì)發(fā)生自連，保證偶聯(lián)物的特異性和均一性；

    ü  試劑盒所使用的交聯(lián)劑增加了延長(zhǎng)臂，確保不會(huì)因?yàn)榈鞍踪|(zhì)位阻而影響發(fā)光效率；

    ü  鑒于R-PE的蛋白骨架特性，其抗淬滅能力更強(qiáng)。

                                                  

     

    試劑盒已經(jīng)提供材料：

    ü  R-PE蛋白凍干粉      1mg*1支  可用于標(biāo)記300-500ug抗體

    ü  R-PE蛋白活化試劑    2mg*1支  使用前加ddH2O 200ul

    ü  修飾反應(yīng)液        30ml*1瓶

    ü  標(biāo)記緩沖液        30ml*1瓶

    ü  抗體修飾試劑干粉    2mg*1支 使用前加1000ul ddH2O

    ü  30KMWCO超濾管      3支

    ü  封閉試劑         1支 使用前加DMSO 5ul

    ü  DMSO溶劑         200ul*1支

    ü  說明書          1份

    其他需要自備試劑材料：

    2  待標(biāo)記的生物分子；

    2  移液器及吸頭；

    2  去離子水。

    試劑盒儲(chǔ)存

    試劑盒抗體修飾試劑、R-PE蛋白活化試劑和封閉試劑，放在-20?C，其余組分放在2-8℃可保存6個(gè)月以上。

    試劑盒操作流程：

    1a.抗體的修飾 與1b.R-PE的活化兩個(gè)步驟同時(shí)進(jìn)行

    1a.抗體的修飾

    1）抗體修飾試劑干粉溶解于ddH2O配制成2mg/ml的抗體修飾試劑液。

    2）取待標(biāo)記抗體（純度>90%），用修飾反應(yīng)液調(diào)整濃度到 5mg/ml左右，按照每mg抗體加入5μl抗體修飾試劑液，輕輕混勻，在室溫下攪拌反應(yīng) 60-90分鐘。

    3）反應(yīng)完成后，轉(zhuǎn)移到超濾管內(nèi)芯，并添加標(biāo)記緩沖液，通過超濾管多次離心置換溶液去除多余抗體修飾試劑，超濾管內(nèi)芯收集液為修飾抗體，并調(diào)節(jié)濃度至 3mg/ml。

     

    1b.R-PE蛋白的活化

    1）取1支R-PE蛋白凍干粉用標(biāo)記緩沖液重懸到5mg/ml濃度R-PE蛋白溶液；

    2）將R-PE蛋白活化試劑溶解于ddH2O，配制成5mg/ml R-PE蛋白活化試劑溶液，按照每mg R-PE蛋白加入100ul的比例加入到R-PE蛋白溶液，室溫避光反應(yīng)2小時(shí)；

    3）反應(yīng)完畢，轉(zhuǎn)移到超濾管內(nèi)芯，通過超濾管離心4次，每次120，00rpm 5min,置換為標(biāo)記緩沖液,以去除游離的R-PE蛋白活化試劑，濾芯內(nèi)溶液即為活化R-PE蛋白。

     

    2.活化R-PE蛋白與抗體偶聯(lián)

    1）活化R-PE蛋白濃度調(diào)整為5mg/ml；

    2）將修飾抗體與活化R-PE蛋白，按照質(zhì)量比1:3比例（每mg修飾抗體對(duì)應(yīng)3mg活化R-PE蛋白）混合，室溫避光反應(yīng)2小時(shí)；

    3）將封閉試劑管中加入5ul DMSO配成封閉試劑液，按照每0.5mg抗體5ul的體積封閉試劑液加入步驟2）反應(yīng)產(chǎn)物中，封閉未反應(yīng)完的活性基團(tuán)；

    4）將步驟3)溶液加入超濾管通過反復(fù)離心置換標(biāo)記緩沖液，去除封閉試劑等；

    5）標(biāo)記好的抗體分裝，加入適當(dāng)保護(hù)劑，-20℃保存?zhèn)溆谩?/span>